HE染色

HE染色（苏木精 - 伊红染色）是组织学和病理学中最常用的染色方法，用于观察细胞和组织的形态结构。以下是关于HE染色的详细介绍： **一、染色原理** 1. 苏木精染色原理   - 苏木精是一种碱性染料，它可以与细胞核中的酸性物质（如DNA和RNA）结合。苏木精本身没有颜色，在经过氧化后变成苏木精氧化产物，带有正电荷。细胞核中的核酸带有负电荷，根据异性电荷相吸的原理，苏木精氧化产物与细胞核中的核酸结合，使细胞核染成蓝紫色。 2. 伊红染色原理   - 伊红是一种酸性染料，它主要与细胞质中的碱性物质（如蛋白质）结合。伊红带有负电荷，而细胞质中的蛋白质等成分带有正电荷，两者结合后使细胞质、细胞外基质等染成粉红色。 **二、实验材料和设备** 1. 材料   - 组织样本：可以是石蜡切片、冰冻切片或细胞涂片。石蜡切片是将组织经过固定、脱水、透明、浸蜡等一系列处理后制成的切片，是最常见的组织学观察材料；冰冻切片是在低温下将组织快速冷冻后切片，主要用于一些需要快速诊断的情况；细胞涂片则是将细胞均匀地涂抹在玻片上，用于观察细胞形态。   - 染色试剂：包括苏木精染液、伊红染液、分化液（如1%盐酸酒精，用于去除细胞核染色过程中的多余苏木精）、返蓝液（如饱和碳酸锂溶液，用于使细胞核颜色更鲜明）、封片剂（如中性树胶）。   - 其他试剂：如乙醇（用于脱水）、二甲苯（用于透明）。 2. 设备   - 切片机：用于制作石蜡切片或冰冻切片。   - 染色缸：用于盛放各种染色试剂，方便组织切片在不同试剂中浸泡染色。   - 显微镜：用于观察染色后的组织切片，评估染色效果和组织结构。   - 载玻片和盖玻片：用于承载组织切片和封片。 **三、实验步骤** 1. 石蜡切片染色步骤   - 脱蜡至水：     - 将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ中浸泡10 - 15分钟，使石蜡溶解，更换二甲苯Ⅱ，再浸泡10 - 15分钟。     - 然后依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各浸泡5分钟左右，最后用蒸馏水冲洗切片，使切片从有机相过渡到水相。   - 苏木精染色：     - 将切片放入苏木精染液中染色5 - 15分钟，具体染色时间根据组织类型和切片厚度等因素调整。染色时间过长，细胞核颜色过深；染色时间过短，细胞核染色不充分。   - 分化：     - 染色后，将切片放入1%盐酸酒精分化液中浸泡数秒至数十秒，轻轻晃动切片，使细胞核颜色适度变浅，去除多余的苏木精，直到在显微镜下观察细胞核呈现清晰的蓝紫色且背景干净。   - 返蓝：     - 将切片放入饱和碳酸锂溶液或自来水（流水）中浸泡5 - 10分钟，使细胞核颜色更加鲜明。   - 伊红染色：     - 将切片放入伊红染液中染色2 - 5分钟，使细胞质和细胞外基质染上粉红色。   - 脱水、透明和封片：     - 染色后，将切片依次放入70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ各浸泡5分钟左右进行脱水。     - 然后放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡5 - 10分钟进行透明。     - 最后在切片上滴加适量中性树胶，盖上盖玻片，用镊子轻轻按压，使盖玻片与切片贴合紧密，避免产生气泡。 2. 冰冻切片染色步骤   - 固定：     - 新鲜的冰冻切片从冰箱中取出后，立即放入固定液（如4%多聚甲醛）中固定10 - 15分钟，使组织细胞的形态和结构固定。   - 水洗：     - 用蒸馏水冲洗切片3 - 5次，每次3 - 5分钟，去除固定液。   - 苏木精染色、分化、返蓝和伊红染色：     - 步骤与石蜡切片基本相同，但由于冰冻切片没有经过石蜡包埋等处理，组织结构相对脆弱，在操作过程中要更加小心，避免切片损坏。   - 脱水、透明和封片：     - 因为冰冻切片较薄，脱水和透明时间可以适当缩短。通常在70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇各浸泡3 - 5分钟，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡3 - 5分钟，然后进行封片。 3. 细胞涂片染色步骤   - 固定：     - 将细胞涂片在空气中自然干燥后，放入甲醇或95%乙醇中固定10 - 15分钟。   - 染色：     - 按照苏木精染色、分化、返蓝和伊红染色的步骤进行操作，染色时间可根据细胞密度和涂片厚度适当调整。   - 水洗和封片：     - 染色后用蒸馏水冲洗涂片，去除多余的染液，然后自然干燥或用吹风机吹干涂片，滴加封片剂，盖上盖玻片。 **四、结果观察与分析** 1. 细胞核   - 正常情况下，细胞核被染成蓝紫色，颜色深浅均匀。可以观察细胞核的大小、形状、位置以及核内结构（如核仁）。例如，在肿瘤细胞中，细胞核通常比正常细胞的细胞核大，形状不规则，核仁明显增大。 2. 细胞质   - 细胞质呈粉红色。通过观察细胞质的染色情况，可以了解细胞的功能状态和分化程度。例如，在分泌细胞中，细胞质可能含有较多的分泌颗粒，染色后可以看到细胞质中有一些深色的小点。 3. 组织和细胞形态   - 可以观察组织的整体结构，如上皮组织的层次、结缔组织的纤维排列、肌肉组织的肌纤维走向等。同时，也可以观察细胞之间的连接方式（如紧密连接、桥粒等）和细胞在组织中的分布情况。例如，在正常的皮肤组织中，表皮的角质形成细胞从基底层到角质层呈现出有规律的分层排列。 **五、注意事项** 1. 试剂质量   - 染色试剂的质量对染色效果有很大影响。苏木精和伊红染液应选择质量好、稳定性高的产品，并且要按照说明书的要求进行配制和保存。例如，苏木精染液需要经过氧化成熟后才能使用，伊红染液的pH值会影响染色效果。 2. 染色时间和温度   - 染色时间和温度是影响染色效果的重要因素。不同的组织类型、切片厚度和染色试剂的批次等都会导致最佳染色时间的差异。一般来说，在常温下染色效果较好，但在温度较低时，染色时间可能需要适当延长。 3. 操作过程中的细节   - 在脱蜡、脱水、透明等过程中，要确保试剂的更换及时、彻底。如果脱蜡不彻底，会影响后续的染色效果；如果脱水不完全，在透明和封片过程中可能会出现云雾状的模糊区域。在封片时，要注意避免产生气泡，气泡会影响观察效果。